Aptamer xarakteristikalarini tahlil qilish xizmati

Alpha Lifetech ko'p yillar davomida aptamer bilan bog'liq xizmatlarni ko'rsatib kelmoqda va hozirda aptamer sintezi, SELEX skriningi, yuqori o'tkazuvchanlikdagi ketma-ketlik va aptamerni optimallashtirish va tavsiflash kabi keng qamrovli aptamer ishlab chiqish sxemalarini taqdim eta oladi. Aptamerlarni skrining qilish uchun SELEX usulining afzalliklariga asoslanib, Alpha Lifetech aptamerlarni skrining qilish uchun ko'proq usullarni kengaytirdi.

Aptamer xarakteristikasini tahlil qilishga kirish

Yaqinlikni tekshirish

Optimallashtirilgan aptamer yaqinligi aptamer bog'lanish tahlilining tegishli usullari bilan tasdiqlangan. Misollar orasida izotermik titrlash kalorimetriyasi (ITC), oqim sitometriyasi (FCM) va sirt plazmon rezonansi (SPR), mikrofluidika va boshqalar mavjud. Aptamer yaqinligi odatda dissotsiatsiya konstantasi (KD) bilan ifodalanadi, bu fizik miqdor bo'lib, u qaytar reaksiyada molekulyar dissotsiatsiya darajasini aniqlash uchun ishlatiladi. KD qiymati qanchalik kichik bo'lsa, kompleks shunchalik barqaror bo'ladi, ya'ni yaqinlik shunchalik kuchli bo'ladi; Aksincha, KD qiymati qanchalik katta bo'lsa, kompleks shunchalik beqaror va yaqinlik zaifroq bo'ladi. Bu qadam aptamerning ishlashini aniqlashning kalitidir, aptamer yaqinligining yetilishini ta'minlaydi va amaliy qo'llanmalarda yuqori yaqinlik va selektivlik bilan maqsadli molekulaga bog'lanishi mumkin.

1-rasm. Aptamer affinitetining yetilish jarayoni. Ma'lumotnoma manbasi:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Funktsiyani tekshirish

Affinlikni tekshirishdan tashqari, aptamerning funktsiyasini tekshirish kerak. Bunga aptamerning barqarorligi, o'ziga xosligi va ma'lum bir muhitda boshqa molekulalar bilan o'zaro ta'sirini tekshirish kiradi. Funksional tekshirish natijalari aptamerlarning ilmiy tadqiqotlar va sanoat qo'llanmalaridagi qiymatiga bevosita ta'sir qiladi.

Maxsus tekshirish

Raqobatbardosh tajriba: Aptamerning ma'lum bir nishonga bog'lanish qobiliyati boshqa shunga o'xshash nishonlar ishtirokida baholanadi. Agar aptamer boshqa molekulalarning aralashuvisiz nishon molekulasiga maxsus bog'lana olsa, bu uning yuqori o'ziga xoslikka ega ekanligini ko'rsatadi.

O'zaro reaksiya tajribasi: Aptamer o'ziga xosligini tekshirish uchun faqat ma'lum bir nishonga bog'langanligini tekshirish uchun bir qator o'zaro bog'liq yoki o'zaro bog'liq bo'lmagan nishonlarga bog'langan.

Barqarorlikni tekshirish

Nukleaza parchalanishi tajribasi: Aptamerlar turli konsentratsiyadagi nukleazalarga duchor bo'ldi va ularning parchalanishi kuzatildi. Turli vaqt nuqtalarida parchalanish darajasini taqqoslash orqali aptamerning antinukleaza parchalanish qobiliyatini baholash mumkin.

Harorat va vaqt barqarorligi bo'yicha tajriba: Aptamer uning strukturaviy va funktsional barqarorligini kuzatish uchun turli harorat va vaqt sharoitlariga joylashtirildi. Bu aptamerlar uchun optimal saqlash va foydalanish sharoitlarini aniqlashga yordam beradi.

Biologik faollikni aniqlash

Tegishli usul odatda nuklein kislota aptamerining aniq qo'llanilish maqsadiga muvofiq tanlanadi.

(1) Molekulyar darajadagi sinov: Aptamer maqsadli molekula bilan birlashgandan keyin hosil bo'lgan komplekslarni aniqlash yoki aptamer keltirib chiqaradigan maqsadli molekulaning ifoda darajasidagi o'zgarishlarni aniqlash uchun gel elektroforez, Western blot va boshqalar kabi molekulyar biologiya usullaridan foydalanish.

(2) Hujayra darajasida sinov: Hujayra madaniyati texnologiyasidan foydalangan holda, aptamerlar hujayra morfologiyasi, proliferatsiyasi va apoptozi kabi biologik o'zgarishlarni kuzatish va aptamerlarning biologik faolligini baholash uchun maqsadli hujayralar bilan inkubatsiya qilinadi.

(3) Hayvonlar modelini sinovdan o'tkazish: Tegishli hayvon modellarida nuklein kislota aptamerlari in'ektsiya yoki dori vositasini yuborish yo'li bilan beriladi va aptamerlarning biologik faolligi va xavfsizligini in vivo baholash uchun hayvonlarning fiziologik ko'rsatkichlari va patologik o'zgarishlari kuzatiladi.