Dịch vụ phân tích đặc tính aptamer

Alpha Lifetech đã cung cấp các dịch vụ liên quan đến aptamer trong nhiều năm và hiện có thể cung cấp các giải pháp phát triển aptamer toàn diện như tổng hợp aptamer, sàng lọc SELEX, giải trình tự tốc độ cao, tối ưu hóa và đặc tính hóa aptamer. Dựa trên ưu điểm của phương pháp SELEX trong sàng lọc aptamer, Alpha Lifetech đã mở rộng thêm nhiều phương pháp sàng lọc aptamer khác.

Giới thiệu về phân tích đặc tính của aptamer

Xác minh mối quan hệ

Độ ái lực tối ưu của aptamer đã được xác minh bằng các kỹ thuật liên quan trong thử nghiệm liên kết aptamer. Ví dụ bao gồm phương pháp đo nhiệt lượng chuẩn độ đẳng nhiệt (ITC), đo tế bào dòng chảy (FCM), cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR), vi lưu chất, v.v. Độ ái lực của aptamer thường được biểu thị bằng hằng số phân ly (KD), một đại lượng vật lý được sử dụng để định lượng mức độ phân ly phân tử trong một phản ứng thuận nghịch. Giá trị KD càng nhỏ, phức hợp càng ổn định, tức là độ ái lực càng mạnh; ngược lại, giá trị KD càng lớn, phức hợp càng không ổn định và độ ái lực càng yếu. Bước này là chìa khóa để xác định hiệu suất của aptamer, đảm bảo sự trưởng thành về độ ái lực của aptamer và có thể liên kết với phân tử mục tiêu với độ ái lực và tính chọn lọc cao trong các ứng dụng thực tế.

Hình 1. Quá trình trưởng thành ái lực của aptamer. Nguồn tham khảo:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Xác minh chức năng

Ngoài việc xác minh ái lực, chức năng của aptamer cũng cần được xác minh. Điều này bao gồm việc xác minh tính ổn định, tính đặc hiệu và sự tương tác của aptamer với các phân tử khác trong một môi trường cụ thể. Kết quả xác minh chức năng sẽ ảnh hưởng trực tiếp đến giá trị của aptamer trong nghiên cứu khoa học và ứng dụng công nghiệp.

Xác minh cụ thể

Thí nghiệm cạnh tranh: Khả năng liên kết của aptamer với một mục tiêu cụ thể được đánh giá khi có mặt các mục tiêu tương tự khác. Nếu aptamer có thể liên kết đặc hiệu với phân tử mục tiêu mà không bị ảnh hưởng bởi các phân tử khác, điều đó cho thấy nó có tính đặc hiệu cao.

Thí nghiệm phản ứng chéo: Aptamer được gắn vào một loạt các mục tiêu có liên quan hoặc không liên quan để xem liệu nó chỉ liên kết với một mục tiêu cụ thể hay không, nhằm xác minh tính đặc hiệu của nó.

Kiểm tra độ ổn định

Thí nghiệm phân hủy bởi nuclease: Các aptamer được tiếp xúc với các nồng độ nuclease khác nhau và quá trình phân hủy của chúng được quan sát. Bằng cách so sánh mức độ phân hủy ở các thời điểm khác nhau, khả năng chống phân hủy bởi nuclease của aptamer có thể được đánh giá.

Thí nghiệm về độ ổn định theo nhiệt độ và thời gian: Aptamer được đặt trong các điều kiện nhiệt độ và thời gian khác nhau để quan sát độ ổn định về cấu trúc và chức năng của nó. Điều này giúp xác định các điều kiện bảo quản và sử dụng tối ưu cho aptamer.

Nhận dạng hoạt tính sinh học

Phương pháp phù hợp thường được lựa chọn dựa trên mục tiêu ứng dụng cụ thể của aptamer axit nucleic.

(1)Kiểm tra ở cấp độ phân tử: Sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử, chẳng hạn như điện di gel, Western blot, v.v., để phát hiện các phức hợp được hình thành sau khi aptamer kết hợp với phân tử mục tiêu, hoặc phát hiện những thay đổi trong mức độ biểu hiện của phân tử mục tiêu do aptamer gây ra.

(2)Thử nghiệm ở cấp độ tế bào: Bằng cách sử dụng công nghệ nuôi cấy tế bào, aptamer được ủ với các tế bào đích để quan sát những thay đổi sinh học như hình thái tế bào, sự tăng sinh và apoptosis, và đánh giá hoạt động sinh học của aptamer.

(3)Thử nghiệm trên mô hình động vật: Trong các mô hình động vật thích hợp, các aptamer axit nucleic được tiêm hoặc dùng thuốc, và các chỉ số sinh lý và những thay đổi bệnh lý của động vật được quan sát để đánh giá hoạt động sinh học và tính an toàn của các aptamer trong cơ thể sống.