Nền tảng phát triển Aptamer

Aptamer là oligonucleotide mạch đơn (DNA, RNA hoặc XNA) có đặc tính ái lực cao và độ đặc hiệu cao, liên kết đặc hiệu với các phân tử mục tiêu như kháng thể và được sử dụng rộng rãi để phát triển các cảm biến sinh học, chẩn đoán và điều trị.

Nền tảng aptamer do Alpha Lifetech cung cấp bao gồm hai danh mục: nền tảng tổng hợp aptamer, chủ yếu liên quan đến dịch vụ tổng hợp thư viện aptamer SELEX và dịch vụ phát triển aptamer (DNA, RNA hoặc XNA), và nền tảng sàng lọc aptamer bao gồm các dịch vụ sàng lọc dựa trên công nghệ SELEX đối với protein, peptide, tế bào, phân tử nhỏ, ion kim loại và các phân tử mục tiêu khác, cũng như các dịch vụ phân tích nhận dạng và tối ưu hóa aptamer hạ nguồn.

Nền tảng tổng hợp Aptamer

Dịch vụ tổng hợp thư viện aptamer SELEX

Dịch vụ tổng hợp thư viện aptamer SELEX chủ yếu liên quan đến việc xây dựng một thư viện chứa một số lượng lớn các trình tự oligonucleotide mạch đơn ngẫu nhiên bằng cách tổng hợp hóa học trong ống nghiệm theo các phân tử mục tiêu. Xây dựng thư viện là điểm khởi đầu của công nghệ SELEX, cung cấp các trình tự ứng viên dồi dào cho quá trình sàng lọc tiếp theo bằng cách xây dựng các thư viện ngẫu nhiên khổng lồ và tăng khả năng sàng lọc các aptamer có ái lực cao.

Tổng hợp thư viện chủ yếu được chia thành các bước sau:

Các bước	Chi tiết công nghệ
Xác định các phân tử mục tiêu	Xác định các phân tử mục tiêu cần sàng lọc aptamer, có thể là protein, axit nucleic, phân tử nhỏ, ion kim loại, v.v.
Thiết kế chuỗi ngẫu nhiên	Chiều dài chuỗi ngẫu nhiên, thành phần bazơ và các thông số khác được thiết kế theo đặc điểm của phân tử mục tiêu và yêu cầu sàng lọc. Thông thường, chuỗi ngẫu nhiên có chiều dài từ hàng chục đến hàng trăm bazơ.
Tổng hợp các chuỗi cố định	Các đoạn oligonucleotide có trình tự cố định (như trình tự mồi PCR) ở cả hai đầu được thiết kế và tổng hợp, sẽ được sử dụng trong quá trình khuếch đại và sàng lọc tiếp theo.

Thư viện tổng hợp vẫn cần được xử lý thêm để kiểm soát chất lượng. Nồng độ của thư viện được xác định để đảm bảo khả năng áp dụng trong quá trình sàng lọc tiếp theo. Tính đa dạng và độ chính xác của các chuỗi ngẫu nhiên trong thư viện đã được xác minh bằng phương pháp giải trình tự và các phương pháp khác để đảm bảo chất lượng của thư viện đáp ứng các yêu cầu sàng lọc.

Thông qua các bước trên, có thể tổng hợp được thư viện aptamer SELEX chất lượng cao và đa dạng, có thể cung cấp nhiều trình tự ứng viên cho quá trình sàng lọc tiếp theo.

Dịch vụ phát triển Aptamer (DNA, RNA hoặc XNA)

Aptamer thường đề cập đến các aptamer axit nucleic. Các aptamer axit nucleic bao gồm các aptamer DNA, aptamer RNA và aptamer XNA là các aptamer axit nucleic được biến đổi về mặt hóa học. Kỹ thuật SELEX được sử dụng rộng rãi để phát triển các aptamer. Quy trình làm việc cơ bản của các dịch vụ phát triển aptamer bao gồm xây dựng thư viện, liên kết mục tiêu, phân lập và tinh chế, khuếch đại, nhiều vòng sàng lọc và xác định trình tự. Trong nhiều năm, chúng tôi đã tập trung vào việc xây dựng thư viện và có nhiều kinh nghiệm trong phát triển aptamer. Chúng tôi cam kết cung cấp cho khách hàng các dịch vụ tốt hơn.

Quy trình công nghệ SELEX

Quy trình SELEX bao gồm nhiều vòng, mỗi vòng bao gồm các bước chính sau:

Liên kết thư viện và mục tiêu

Thư viện axit nucleic được xây dựng được trộn với các phân tử mục tiêu cụ thể (như protein, hợp chất phân tử nhỏ, v.v.) để các trình tự axit nucleic trong thư viện có cơ hội liên kết với các phân tử mục tiêu.

Cô lập các phân tử không liên kết

Trình tự axit nucleic không liên kết với phân tử mục tiêu được tách ra khỏi hỗn hợp bằng các phương pháp cụ thể như sắc ký ái lực, tách hạt từ, v.v.

Sự khuếch đại của các phân tử liên kết

Trình tự axit nucleic liên kết với phân tử mục tiêu được khuếch đại, thường sử dụng công nghệ phản ứng chuỗi polymerase (PCR). Đối với giai đoạn sàng lọc tiếp theo, các trình tự được khuếch đại sẽ được sử dụng làm thư viện bắt đầu.

Hình 1: Quy trình sàng lọc SELEX

Nền tảng sàng lọc Aptamer

Dịch vụ sàng lọc Aptamer

Alpha Lifetech cung cấp nhiều dịch vụ sàng lọc aptamer chuyên biệt áp dụng nhiều phương pháp SELEX khác nhau cho các loại phân tử khác nhau của bạn:

Loại mục tiêu	Chi tiết kỹ thuật
Sàng lọc protein Aptamer bằng SELEX	Mục đích chính của sàng lọc protein aptamer là sàng lọc các aptamer có thể liên kết đặc hiệu với các phân tử protein mục tiêu. Các aptamer này dễ tổng hợp hơn, ổn định hơn và ít bị ảnh hưởng bởi các yếu tố môi trường hơn.
Kiểm tra Aptamer Peptide bằng SELEX	Aptamer peptide là một lớp trình tự peptide ngắn có độ đặc hiệu và ái lực cao, có thể liên kết đặc hiệu với các chất mục tiêu và cho thấy tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong lĩnh vực y sinh học. Thông qua một quy trình sàng lọc cụ thể, các aptamer peptide có thể liên kết đặc hiệu với các phân tử mục tiêu được sàng lọc từ một số lượng lớn các thư viện trình tự peptide ngẫu nhiên.
Sàng lọc Aptamer đặc hiệu tế bào (Cell-SELEX)	Các tế bào đích hoặc các phân tử cụ thể trên bề mặt tế bào được chuẩn bị như các mục tiêu. Mục tiêu có thể là toàn bộ tế bào, thụ thể trên màng tế bào, protein hoặc các phân tử nhỏ khác.
Sàng lọc Aptamer phân tử nhỏ bằng Capture SELEX	Capture SELEX là một kỹ thuật sàng lọc trong ống nghiệm để sàng lọc các aptamer phân tử nhỏ, là một biến thể của SELEX. Capture SELEX đặc biệt phù hợp để sàng lọc aptamer của các mục tiêu phân tử nhỏ, thường có ít nhóm chức năng hơn và khó cố định trực tiếp trên các chất mang pha rắn.
Dịch vụ SELEX dựa trên Động vật sống	Dịch vụ sàng lọc dựa trên động vật sống là một kỹ thuật thử nghiệm được sử dụng rộng rãi trong các lĩnh vực khoa học sinh học, y học và công nghệ sinh học, sử dụng động vật sống làm mô hình thử nghiệm để sàng lọc và đánh giá các phân tử, bác sĩ, liệu pháp hoặc quy trình sinh học cụ thể. Các dịch vụ được thiết kế để mô phỏng môi trường sinh lý trong cơ thể con người để dự đoán và đánh giá chính xác hơn hiệu quả và tính an toàn của kết quả thử nghiệm trong cơ thể con người.

Dịch vụ tối ưu hóa Aptamer

Tính ưa nước, mất ái lực cao trong quá trình sản xuất và bài tiết nhanh các aptamer hạn chế ứng dụng của chúng. Hiện nay, nhiều phương pháp tối ưu hóa khác nhau đã được khám phá để nâng cao hiệu suất của các aptamer.

Chúng ta cũng có nhiều cách khác nhau để tối ưu hóa aptamer bao gồm cắt cụt, sửa đổi, liên hợp với nhóm thích hợp (thiol, carboxyl, amin, fluorophore, v.v.).

Dịch vụ phân tích đặc tính Aptamer

Dịch vụ phân tích đặc tính aptamer là dịch vụ chuyên nghiệp về phân tích cấu trúc đánh giá hiệu suất và xác minh chức năng của aptamer thu được để đảm bảo aptamer đáp ứng các yêu cầu về khả năng liên kết, độ ổn định và độ đặc hiệu cụ thể. Chủ yếu bao gồm phân tích ái lực và độ đặc hiệu, đánh giá độ ổn định và xác minh chức năng sinh học.