Dịch vụ nghiên cứu Aptamer

Giới thiệu về Aptamer

Aptamer là các phân tử axit nucleic mạch đơn (như DNA hoặc RNA) được sàng lọc trong ống nghiệm từ một thư viện các oligonucleotide tổng hợp với trình tự được chỉ định ngẫu nhiên bằng một quy trình gọi là sàng lọc SELEX, bao gồm nhiều vòng chọn lọc lặp đi lặp lại. Các thành phần chính của dịch vụ phát triển aptamer do Alpha Lifetech sở hữu bao gồm xây dựng thư viện aptamer, sàng lọc aptamer SELEX, giải trình tự aptamer SELEX, phân tích trình tự aptamer và các phân tích aptamer khác.

Giải trình tự SELEX kết hợp sàng lọc aptamer SELEX và giải trình tự tốc độ cao. Thông qua giải trình tự aptamer SELEX, trình tự cụ thể của aptamer liên kết với mục tiêu có thể được xác định hiệu quả, cung cấp dữ liệu cơ bản cho việc phân tích và ứng dụng trình tự aptamer tiếp theo.

Aptamer được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu khoa học, điều trị bệnh tật, chế tạo cảm biến sinh học, phát hiện thuốc và giám sát môi trường. Tuy nhiên, các aptamer oligonucleotide được sàng lọc trong ống nghiệm dễ bị phân hủy trong cơ thể sống và thậm chí còn thể hiện độc tính. Do đó, sau khi tối ưu hóa các aptamer đã được sàng lọc, cần phải tiến hành phân tích trong ống nghiệm để đánh giá sự thành công của quá trình phát triển aptamer. Dựa trên các nhu cầu phân tích khác nhau của khách hàng, Alpha Lifetech cung cấp nhiều chiến lược phân tích aptamer để khách hàng lựa chọn.

Hình 1. Sơ đồ phân tích aptamer. Nguồn tham khảo:Thevendran R, Citartan M. 2022. Các xét nghiệm để ước tính ái lực liên kết của aptamer.

Giới thiệu về Dịch vụ Nghiên cứu Aptamer

Phân tích độ ổn định của Aptamer

Thí nghiệm phân hủy nuclease

Bằng cách ủ aptamer với các loại nuclease khác nhau (như DNase, RNase, v.v.) trong điều kiện cụ thể, người ta quan sát sự phân hủy của aptamer để đánh giá khả năng chống phân hủy của nó. Điều này có lợi cho việc xác định tính ổn định và độ bền của aptamer trong các ứng dụng thực tế.

Phương pháp đánh dấu huỳnh quang

Tính ổn định của aptamer được đánh giá gián tiếp bằng cách gắn nhãn các chất phát huỳnh quang lên aptamer và quan sát sự thay đổi của tín hiệu huỳnh quang trước và sau khi liên kết với mục tiêu. Ví dụ, khi aptamer liên kết với mục tiêu, cấu trúc của nó có thể thay đổi, dẫn đến tín hiệu huỳnh quang tăng hoặc giảm.

Phân tích độ ổn định nhiệt

Độ bền nhiệt của aptamer được đánh giá bằng cách đo sự thay đổi nhiệt độ nóng chảy (giá trị Tm) ở các nhiệt độ khác nhau. Nhiệt độ nóng chảy của aptamer càng cao thì độ bền nhiệt càng tốt.

Phân tích ổn định động

Cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR) và các công nghệ khác đã được sử dụng để theo dõi quá trình liên kết và tách rời giữa aptamer và mục tiêu trong thời gian thực, thu được các thông số động (như hằng số tốc độ liên kết, hằng số tốc độ phân ly, v.v.), hiểu rõ hơn cơ chế tương tác giữa aptamer và mục tiêu, và đánh giá tính ổn định động của nó.

Phân tích ổn định kết cấu

Phương pháp tinh thể học tia X, cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) và các kỹ thuật sinh học cấu trúc khác đã được sử dụng để phân tích cấu trúc ba chiều của aptamer và độ ổn định cấu trúc của nó.

Phân tích đặc hiệu Aptamer

Thử nghiệm liên kết aptamer

Độ ái lực được đánh giá bằng cách thực hiện xét nghiệm liên kết aptamer để đo hằng số liên kết giữa aptamer và phân tử mục tiêu, chẳng hạn như hằng số phân ly Kd. Giá trị Kd càng thấp cho thấy độ ái lực càng cao. Xét nghiệm liên kết aptamer có thể sàng lọc các ứng viên thuốc có khả năng liên kết cao, sau đó tiến hành các nghiên cứu dược động học và dược lực học tiếp theo.

Thí nghiệm sàng lọc ngược

Phương pháp sàng lọc ngược là một phương pháp sàng lọc nhằm nhanh chóng loại bỏ các phân tử không phải mục tiêu khỏi một lượng lớn các phân tử ứng cử viên. Sàng lọc ngược được thiết kế để loại bỏ các phân tử không có đặc tính hoặc chức năng này. Chìa khóa của sàng lọc ngược là lựa chọn các dấu hiệu hoặc điều kiện sàng lọc ngược thích hợp cho phép xác định và loại bỏ các phân tử không phải mục tiêu trong quá trình sàng lọc. Trong thí nghiệm này, việc lựa chọn các phân tử không phải mục tiêu rất quan trọng. Cần đảm bảo rằng các phân tử không phải mục tiêu được chọn đại diện cho các chất có thể gây nhiễu quá trình sàng lọc aptamer và các yếu tố gây nhiễu tiềm tàng được bao phủ càng đầy đủ càng tốt.

Thí nghiệm ức chế cạnh tranh

Bằng cách thêm các chất cạnh tranh dư thừa (chẳng hạn như các phân tử có cấu trúc tương tự với phân tử mục tiêu) vào hệ thống liên kết giữa aptamer và phân tử mục tiêu, người ta quan sát thấy sự thay đổi khả năng liên kết giữa aptamer và phân tử mục tiêu. Nếu khả năng liên kết của aptamer với phân tử mục tiêu giảm đáng kể, điều đó cho thấy aptamer có tính đặc hiệu cao.

Trong một số trường hợp, thí nghiệm ức chế cạnh tranh có thể được sử dụng như một phần hoặc bổ trợ cho các thí nghiệm sàng lọc ngược. Ví dụ, trong quá trình sàng lọc thuốc, khả năng liên kết của phân tử thuốc với protein mục tiêu có thể được đánh giá bằng các thí nghiệm ức chế cạnh tranh, và sau đó các thí nghiệm sàng lọc ngược có thể được sử dụng để loại bỏ những hợp chất liên kết quá mạnh với các tế bào hoặc mô bình thường.

Phân tích độc tính tế bào của Aptamer

Có nhiều phương pháp thực nghiệm khác nhau để phân tích độc tính của aptamer, được thiết kế để đánh giá tác động của aptamer lên sự sống sót, tăng sinh hoặc chức năng của tế bào.

Phương pháp	Giới thiệu chi tiết	Lợi thế	Điều bất lợi
Phương pháp phát hiện MTT	Phương pháp xét nghiệm MTT dựa trên hoạt động của enzyme trong ty thể của tế bào sống. Enzyme succinate dehydrogenase trong ty thể của tế bào sống có thể khử MTT ngoại sinh thành tinh thể Formazan màu xanh tím không tan trong nước và lắng đọng nó trong tế bào, trong khi tế bào chết không có chức năng này. Hòa tan các tinh thể này bằng dimethyl sulfoxide (DMSO) và phát hiện độ hấp thụ ở các bước sóng cụ thể (như 490nm hoặc 570nm) trên máy đo enzym có thể phản ánh gián tiếp số lượng tế bào sống và do đó đánh giá độc tính của aptamer.	Độ nhạy cao, tiết kiệm và tiện lợi	Khối lượng công việc nặng nề, dung môi hữu cơ có thể gây hại cho tế bào; chỉ có thể thu được kết quả thí nghiệm cuối cùng, và không thể quan sát toàn bộ quá trình gây độc tế bào.
Phương pháp phát hiện CCK-8	Bộ kit đếm tế bào-8 (CCK-8) là một phương pháp phát hiện màu sắc không phóng xạ, độ nhạy cao. CCK-8 chứa WST-8, được khử bởi dehydrogenase trong ty thể của tế bào sống để tạo ra nhiên liệu methyl zan màu cam có độ hòa tan cao trong nước. Lượng thuốc nhuộm mezan được tạo ra có mối quan hệ tuyến tính với số lượng tế bào sống, và số lượng tế bào sống có thể được phản ánh gián tiếp bằng cách đo giá trị hấp thụ ánh sáng của thuốc nhuộm Mezan ở bước sóng 450nm, từ đó đánh giá độc tính tế bào của aptamer.	Thao tác đơn giản, không cần rửa tế bào, phát hiện nhanh chóng, phạm vi phát hiện tuyến tính rộng, độ nhạy cao, độ lặp lại tốt, ít độc hại cho tế bào.	Giá thuốc thử cao; Đôi khi khó phân biệt liệu sự giảm độ hấp thụ là do giảm số lượng tế bào sống hay do giảm hoạt động của enzyme dehydrogenase trong tế bào.
Phương pháp phát hiện LDH	LDH (lactate dehydrogenase) là một enzyme ổn định trong bào tương của tế bào, và khi màng tế bào bị tổn thương, LDH được giải phóng ra ngoài tế bào. LDH có thể xúc tác chuyển hóa axit lactic thành pyruvate, và phản ứng với INT (muối tetrazolium) để tạo thành chất tinh thể màu tím. Bằng cách đo độ hấp thụ của nó ở một bước sóng cụ thể (ví dụ như 490nm), mức độ tổn thương tế bào có thể được phản ánh, và sau đó độc tính của aptamer có thể được đánh giá.	Nó phản ánh trực tiếp tỷ lệ chết của tế bào, ít gây tổn hại cho tế bào và không gây ô nhiễm đồng vị phóng xạ.	Việc phải thường xuyên lấy tế bào ra khỏi lồng ấp khiến thao tác trở nên phức tạp hơn; chỉ có thể thu được kết quả thí nghiệm cuối cùng, chứ không thể quan sát được toàn bộ quá trình gây độc tế bào.
Phân tích hình ảnh tế bào sống theo thời gian thực	Sử dụng máy phân tích hình ảnh tế bào sống thời gian thực, thiết bị được đặt trong lồng ấp để quan sát và ghi lại toàn bộ quá trình chu kỳ tăng trưởng của tế bào theo thời gian thực. Độc tính của aptamer có thể được đánh giá bằng cách phân tích sự thay đổi hình thái và đường cong tăng trưởng của tế bào. Phương pháp này có thể cung cấp video và kết quả định lượng về các quá trình gây độc tế bào trong khi vẫn duy trì môi trường tăng trưởng tế bào ổn định.	Nó có thể theo dõi quá trình gây độc tế bào trong thời gian thực, chụp ảnh không phá hủy, giảm thiểu sự can thiệp và tổn thương đến tế bào; cả video và kết quả định lượng đều có sẵn để phân tích chuyên sâu.	Chi phí thiết bị cao và đòi hỏi kỹ năng vận hành chuyên nghiệp cũng như khả năng phân tích dữ liệu.

KACHI

Ưu điểm của dịch vụ nghiên cứu Aptamer

Kiểm soát chất lượng toàn diện

Các aptamer được tối ưu hóa với độ ổn định cao hơn

Tiết kiệm và hiệu quả. Giá cả cạnh tranh hơn, dịch vụ tốt hơn.

Các địa điểm nghiên cứu toàn diện và nhiều phương pháp nghiên cứu khác nhau

Dịch vụ tư vấn trước bán hàng và hỗ trợ sau bán hàng chuyên nghiệp

Kinh nghiệm phong phú trong phân tích aptamer

Đội ngũ nghiên cứu và phát triển cấp cao

Các dịch vụ liên quan đến aptamer được tùy chỉnh

Quay lại trang Nền tảng Phát triển Aptamer

Nếu có bất kỳ thắc mắc nào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi bất cứ lúc nào.

Leave Your Message

Dịch vụ nổi bật

0102