Dịch vụ xây dựng thư viện hiển thị phage

Alpha Lifetech sở hữu nền tảng hiển thị phage M13/T7 toàn diện để đảm bảo việc xây dựng và sản xuất thư viện kháng thể. Chúng tôi cũng có thể cung cấp các dịch vụ tùy chỉnh, chẳng hạn như sản xuất kháng thể scFv, để đáp ứng nhu cầu của bạn.

LIÊN HỆ VỚI CHÚNG TÔI

Dịch vụ xây dựng thư viện hiển thị phage

Alpha Lifetech đã nghiên cứu sâu rộng công nghệ hiển thị phage trong nhiều năm. Công ty đã xây dựng một nền tảng công nghệ hiển thị phage ổn định hoàn hảo, giúp tiết kiệm thời gian nghiên cứu khoa học hoặc nghiên cứu dự án và tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình sản xuất tiếp theo. Alpha Lifetech cũng cung cấp cho khách hàng các dịch vụ như sản xuất kháng thể VHH, sản xuất kháng thể SCFV, sản xuất kháng thể Fab.

Giới thiệu về kỹ thuật hiển thị phage

Công nghệ hiển thị phage là một kỹ thuật sử dụng phage (một loại virus lây nhiễm vi khuẩn) để tìm kiếm các phân tử liên kết chức năng của các protein hoặc peptide cụ thể. Các kỹ thuật xây dựng thư viện kháng thể phage bao gồm xây dựng thư viện kháng thể Fab, xây dựng thư viện kháng thể scFv, xây dựng thư viện nanobody, v.v. Theo loại vi khuẩn thể, chúng có thể được chia thành M13, T7, T4, λ và các hệ thống khác. Theo loại thư viện, nó có thể được chia thành thư viện peptide ngẫu nhiên, thư viện cDNA, thư viện kháng thể và thư viện protein. Công nghệ hiển thị phage dễ vận hành và chi phí sử dụng thấp. Tuy nhiên, kỹ thuật này hạn chế sự đa dạng của di truyền phân tử trong thư viện, không thể biểu hiện các chuỗi quá dài.

Hiện nay, công nghệ hiển thị phage được sử dụng rộng rãi. Trong đó, có những thành tựu đáng kể trong nghiên cứu và phát triển các loại vắc-xin mới (vắc-xin tổng hợp hiệu quả và chi phí thấp), phát triển thuốc kháng thể (sàng lọc chất ức chế enzyme), truyền tín hiệu tế bào (sàng lọc các epitope mô phỏng) và nghiên cứu các epitope kháng nguyên (điều chế kháng thể đơn dòng).

Giới thiệu về thực khuẩn thể T7

Thể thực khuẩn T7 là DNA mạch kép, chiều dài DNA là 40kb và được bao bọc trong một vỏ capsid có đường kính 60nm. Bộ phận kết nối giữa đầu và đuôi là một cấu trúc vòng được tạo thành từ nhiều bản sao của gp8. Đầu và lõi của thể thực khuẩn T7 tạo thành một cấu trúc hình trụ liên kết với gp8 và có thể kết nối đầu và đuôi.

Hình 1. Sơ đồ mô tả vi khuẩn thể T7.(Thẩm quyền giải quyết: Những tiến bộ trong hệ thống hiển thị phage T7 (Bài tổng quan))

Giới thiệu về thực khuẩn thể M13

Thể thực khuẩn M13 thuộc nhóm thể thực khuẩn dạng sợi, được gọi chung là thể thực khuẩn Ff. Nó có chiều dài 900 nm và chiều rộng 6,5 nm. Nó chứa bộ gen DNA mạch đơn (ssDNA) có chiều dài 6407 bp, bao gồm chín gen mã hóa 11 loại protein khác nhau. Trong số đó, năm protein là protein vỏ, và sáu protein còn lại tham gia vào quá trình nhân lên và lắp ráp của thể thực khuẩn. Protein vỏ có nồng độ cao nhất là protein capsid G8P, được cấu tạo từ khoảng 2700 đơn vị protein và tạo thành lớp vỏ bao quanh nhiễm sắc thể.

Hình 2. Sơ đồ mô tả vi khuẩn thể M13.(Thẩm quyền giải quyết: Những kiến thức cơ bản về công nghệ hiển thị phage kháng thể)

Giới thiệu về thư viện kháng thể hiển thị phage

Việc phát hiện kháng thể ngày càng trở nên quan trọng trong y học hiện đại. Có nhiều phương pháp phát hiện kháng thể khác nhau, nhưng thư viện kháng thể hiển thị bằng thực khuẩn thể được sử dụng nhiều hơn trong khoa học y tế.

Từ năm 1990, nhiều dạng kháng thể khác nhau đã được sử dụng để xây dựng thư viện phage, bao gồm VH, VHH, scFv, diabody và kháng thể Fab. scFv, được cấu tạo từ các miền cấu trúc VH và VL, là kháng thể đơn chuỗi được sử dụng để xây dựng thư viện kháng thể scFv. scFv có đặc điểm là thời gian bán hủy ngắn và tính sinh miễn dịch thấp. Thư viện kháng thể Fab bao gồm VH, VL, CL và CH1, có thể nhanh chóng sàng lọc các kháng thể lý tưởng với ái lực cao. Đơn vị nhỏ nhất có thể liên kết với kháng nguyên mục tiêu - VHH - hiện tạo nên thư viện nanobody. VHH có ưu điểm là cấu trúc đơn giản, thể tích nhỏ, độ hòa tan cao, độ ổn định tốt, dễ điều chế và biểu hiện. Thư viện nanobody tổng hợp (Nb) đang nổi lên như một giải pháp thay thế hấp dẫn cho việc tiêm chủng động vật nhờ khả năng tạo ra nanobody tổng hợp ổn định và có ái lực cao. Nhìn chung, các mảnh kháng thể này được gắn vào G3P của phage M13, và bằng cách nhân bản một lượng lớn gen mã hóa mảnh kháng thể, có thể tạo ra các thư viện kháng thể hiển thị phage lớn, từ đó có thể chọn lọc ra nhiều loại kháng thể khác nhau.

Quy trình xây dựng thư viện phage

Quy trình xây dựng thư viện phage như sau: các mồi đặc hiệu được thiết kế để khuếch đại PCR thu được sản phẩm, sau đó được nối bằng enzyme với vector phage T7/M13, và plasmid phage tái tổ hợp được xây dựng thành công. Plasmid phage tái tổ hợp được chuyển nạp vào tế bào thụ thể TG1, sau đó được phủ lên môi trường chứa kháng sinh thích hợp, và tiến hành nuôi cấy mở rộng sau khi sàng lọc các tế bào chuyển nạp. Sau nhiều vòng nuôi cấy, phage nhân lên nhiều lần trong vi khuẩn và biểu hiện thành công protein hoặc polypeptide mục tiêu. Sau đó, thư viện phage được tinh chế để loại bỏ một số tạp chất và phage không liên kết.

Các vùng biến đổi (VH và VL) tương quan với sự đa dạng kháng thể, và VH và VL được chèn vào vectơ phage cùng với trình tự mã hóa protein phage PIII. Sau khi lắp ráp, hạt phage được bộc lộ và hợp nhất với đầu N của protein vỏ nhỏ III để tạo thành một đoạn kháng thể chức năng, thu được thư viện chứa trình tự DNA kháng thể.

Sau khi kết thúc quá trình tiêm chủng, hiệu giá kháng thể được phát hiện, và máu của động vật được lấy sau khi hiệu giá đạt tiêu chuẩn. Tế bào lympho được phân lập từ máu, RNA được chiết xuất, đoạn mục tiêu được khuếch đại bằng RT-PCR, và đoạn gen vùng V được thu nhận. Gen V được khuếch đại bằng cách sử dụng một mồi đặc hiệu.

Các thư viện kháng thể tự nhiên được tạo ra bao gồm các kháng thể có khả năng gây miễn dịch kém ở động vật, có thể nhắm mục tiêu vào bất kỳ kháng nguyên nào. Kháng thể phage liên kết đặc hiệu với kháng nguyên có thể được thu thập bằng các kỹ thuật sàng lọc giúp cố định hoặc gắn nhãn kháng nguyên.

Kháng nguyên mục tiêu được cố định vào một chất mang rắn, chẳng hạn như lỗ trên đĩa vi giếng, hoặc được gắn với một hạt từ tính. Sau đó, thư viện kháng thể phage được thêm vào để liên kết với kháng nguyên. Sau nhiều lần rửa giải, các phage có ái lực thấp hoặc không đặc hiệu sẽ bị loại bỏ và những phage mang kháng thể đặc hiệu sẽ được giữ lại.

Ứng dụng của phương pháp hiển thị phage

*Việc phát hiện kháng thể ngày càng trở nên quan trọng trong y học hiện đại. Có nhiều phương pháp phát hiện kháng thể khác nhau, nhưng công nghệ hiển thị phage được sử dụng nhiều hơn trong khoa học y tế. Từ năm 1990, nhiều dạng kháng thể khác nhau đã được sử dụng để xây dựng thư viện phage, bao gồm VH, VHH, scFv, diabody và kháng thể Fab.
*Các thư viện peptide thực khuẩn cho phép xác định nhanh chóng trình tự của các epitop protein và đã trở thành một công cụ mạnh mẽ để nghiên cứu sự tương tác giữa các epitop và thụ thể kháng nguyên.
*Các mảnh kháng thể được gắn vào G3P của phage M13, và bằng cách nhân bản một lượng lớn gen mã hóa mảnh kháng thể, có thể tạo ra các thư viện kháng thể hiển thị phage lớn, từ đó có thể chọn lọc ra nhiều loại kháng thể khác nhau.
Hệ thống hiển thị phage T7 có nhiều ưu điểm, bao gồm tính đơn giản, độ an toàn cao, tính ổn định, dễ bảo quản và vận chuyển, do đó hệ thống này được sử dụng trong vắc-xin phòng ngừa và điều trị.
*Hệ thống hiển thị phage T7 có thể phát hiện nhiều loại kháng nguyên khác nhau, chẳng hạn như kháng nguyên bề mặt của vi sinh vật gây bệnh và kháng nguyên ung thư.

Phage