Leave Your Message
slide1

Dịch vụ sàng lọc thư viện hiển thị phage

Công nghệ sàng lọc bằng phương pháp hiển thị phage đã được ứng dụng trong các lĩnh vực như truyền tín hiệu tế bào, vị trí nhận dạng protein và phát triển thuốc, ngoài việc nghiên cứu các epitop kháng nguyên.
LIÊN HỆ VỚI CHÚNG TÔI
01

Dịch vụ sàng lọc thư viện hiển thị phage

Alpha Lifetech đã nghiên cứu sâu rộng công nghệ hiển thị phage trong nhiều năm. Công ty đã xây dựng một nền tảng công nghệ hiển thị phage ổn định hoàn hảo, giúp tiết kiệm thời gian nghiên cứu khoa học hoặc nghiên cứu dự án và tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình sản xuất tiếp theo. Alpha Lifetech cũng cung cấp cho khách hàng các dịch vụ như sản xuất kháng thể VHH, sản xuất kháng thể SCFV, sản xuất kháng thể Fab.
Alpha Lifetech sở hữu nền tảng hiển thị phage M13/T7 toàn diện để đảm bảo việc xây dựng và sản xuất thư viện kháng thể. Chúng tôi cũng có thể cung cấp các dịch vụ tùy chỉnh, chẳng hạn như sản xuất kháng thể scFv và sàng lọc kháng thể tốc độ cao, để đáp ứng nhu cầu của bạn.

Quy trình xây dựng thư viện hiển thị phage

Quy trình xây dựng thư viện phage như sau: các mồi đặc hiệu được thiết kế để khuếch đại PCR thu được sản phẩm, sau đó được nối bằng enzyme với vector phage T7/M13, và plasmid phage tái tổ hợp được xây dựng thành công. Plasmid phage tái tổ hợp được chuyển nạp vào tế bào thụ thể TG1, sau đó được phủ lên môi trường chứa kháng sinh thích hợp, và tiến hành nuôi cấy mở rộng sau khi sàng lọc các tế bào chuyển nạp. Sau nhiều vòng nuôi cấy, phage nhân lên nhiều lần trong vi khuẩn và biểu hiện thành công protein hoặc polypeptide mục tiêu. Sau đó, thư viện phage được tinh chế để loại bỏ một số tạp chất và phage không liên kết.

Phương pháp sàng lọc thư viện hiển thị phage

Thành công của việc sản xuất kháng thể bằng phương pháp hiển thị phage chủ yếu phụ thuộc vào thư viện kháng thể hiển thị phage, và các phương pháp sàng lọc phage phổ biến là sàng lọc pha rắn và pha lỏng. Sàng lọc kháng nguyên pha rắn làm giàu các kháng thể đặc hiệu thông qua 3-4 vòng rửa giải để thu được thư viện kháng thể hiển thị phage; sàng lọc kháng nguyên pha lỏng được thực hiện bằng cách ủ mục tiêu được gắn nhãn biotin và thư viện kháng thể hiển thị phage, sau đó bắt giữ các phage liên kết bằng hạt từ tính. Sàng lọc pha rắn tiêu tốn nhiều kháng nguyên hơn và một số epitope kháng nguyên bị phá hủy. Sàng lọc pha lỏng có đặc điểm là hiệu quả và độ làm giàu cao, nhưng kháng thể thu được kém đặc hiệu hơn. Phương pháp sàng lọc phage phụ thuộc vào nhu cầu thí nghiệm, tất cả đều có tác động nhất định đến hiệu quả sản xuất kháng thể bằng phương pháp hiển thị phage.

Sàng lọc kháng thể tốc độ cao

Việc phát triển kháng thể đã phát triển nhanh chóng trong y học hiện đại. Có nhiều phương pháp phát triển kháng thể khác nhau, nhưng sàng lọc kháng thể tốc độ cao được sử dụng nhiều hơn trong khoa học y tế. Quá trình này có thể thu được một lượng lớn sự đa dạng về kháng thể. Kết hợp với các phương pháp sàng lọc thư viện kháng thể truyền thống có thể cải thiện chất lượng sàng lọc của các thư viện hiển thị phage. Sau khi sàng lọc sinh học, kháng thể có thể được đặc trưng bằng ELISA tốc độ thấp hoặc sàng lọc kháng thể tốc độ cao.
Hình ảnh 2
Hình 1. Sơ đồ quy trình thể hiện trình tự các bước từ việc xây dựng thư viện kháng thể phage đến việc tạo ra kháng thể đơn dòng có ái lực cao với kháng nguyên và tính sinh miễn dịch thấp.(Nguồn tham khảo: Công nghệ hiển thị phage như một nền tảng mạnh mẽ cho việc khám phá thuốc kháng thể - PMC (nih.gov))

Các biện pháp phòng ngừa khi sàng lọc kháng thể bằng phương pháp hiển thị phageCác biện pháp phòng ngừa

Các yếu tố cần xem xét về vùng đệm

Việc lựa chọn dung dịch đệm cần tính đến độ ổn định của mục tiêu, môi trường vi mô liên kết và sự liên kết không đặc hiệu tối thiểu trong kịch bản ứng dụng thực tế. Các protein không liên quan, chất tẩy rửa không ion và nồng độ muối sinh lý có lợi cho việc giảm nhiễu nền. Ngoài ra còn có các điều kiện khác, chẳng hạn như một số mục tiêu có thể yêu cầu bổ sung các cation hóa trị hai hoặc các đồng yếu tố khác vào dung dịch đệm, các đồng yếu tố protein có thể được cố định cùng với mục tiêu, có thể được thêm vào dung dịch đệm phân loại, và thậm chí có thể được sử dụng như một phương tiện để bắt giữ mục tiêu.

Các yếu tố liên quan đến áp suất

Các yếu tố thường được xem xét để tăng áp lực chọn lọc bao gồm nồng độ phân tử mục tiêu, thời gian liên kết, cường độ rửa, v.v. Các kỹ thuật khác để tăng áp lực chọn lọc bao gồm sử dụng chất làm biến tính (như axit, urê và guanidine), dung môi hữu cơ, tăng nhiệt độ hoặc tăng nồng độ các phối tử hoặc mục tiêu cạnh tranh trong dung dịch đệm rửa.
Trong số đó, vòng sàng lọc đầu tiên rất quan trọng. Vòng sàng lọc đầu tiên nhằm mục đích thu thập càng nhiều dòng vô tính dương tính càng tốt từ thư viện đã xây dựng, đồng thời loại bỏ các dòng vô tính không đặc hiệu. Nên sử dụng các mục tiêu phủ xốp hoặc một lượng lớn mục tiêu hòa tan để đảm bảo thu được một lượng lớn phage liên kết, duy trì sự đa dạng của thư viện. Trong các vòng sàng lọc tiếp theo, áp lực chọn lọc nên được tăng lên bằng cách tăng cường quá trình làm giàu, rửa nhiều lần và tăng thời gian rửa, các dòng vô tính có ái lực cao có thể được sàng lọc.

Chiến lược sàng lọc âm tính

Các thẻ kháng nguyên và vật liệu mang trong quá trình sàng lọc là để kiểm tra tất cả các chất trên các phức hợp kháng nguyên, chẳng hạn như thẻ, protein dung hợp và chất nền hỗ trợ. Việc sàng lọc âm tính các chất không phải mục tiêu có thể hạn chế sự làm giàu các kháng thể khác ngoài kháng nguyên mục tiêu.
Toàn bộ tế bào, liposome, đĩa nano-phospholipid và VLP có thể được sàng lọc âm tính bằng cách sử dụng tế bào được chuyển gen mô phỏng hoặc tế bào không được chuyển gen khi sàng lọc các dòng tế bào được chuyển gen.
Loại bỏ hỗn hợp kháng nguyên phức tạp. Có thể thực hiện sàng lọc âm tính nghiêm ngặt đối với các phân tử mục tiêu chưa biết hoặc phức tạp, chẳng hạn như toàn bộ tế bào hoặc protein không tinh khiết.
Chiến lược sử dụng kháng thể chống lại các vị trí cụ thể của kháng nguyên gồm hai phương pháp: một là tách chiết kháng thể có khả năng cạnh tranh với phối tử bằng cách thêm nồng độ phối tử cao, và phương pháp khác là ngăn chặn kháng thể.

Ứng dụng của phương pháp hiển thị phage

*Việc phát hiện kháng thể ngày càng trở nên quan trọng trong y học hiện đại. Có nhiều phương pháp phát hiện kháng thể khác nhau, nhưng công nghệ hiển thị phage được sử dụng nhiều hơn trong khoa học y tế. Từ năm 1990, nhiều dạng kháng thể khác nhau đã được sử dụng để xây dựng thư viện phage, bao gồm VH, VHH, scFv, diabody và kháng thể Fab.
*Các thư viện peptide thực khuẩn cho phép xác định nhanh chóng trình tự của các epitop protein và đã trở thành một công cụ mạnh mẽ để nghiên cứu sự tương tác giữa các epitop và thụ thể kháng nguyên.
*Các mảnh kháng thể được gắn vào G3P ​​của phage M13, và bằng cách nhân bản một lượng lớn gen mã hóa mảnh kháng thể, có thể tạo ra các thư viện kháng thể hiển thị phage lớn, từ đó có thể chọn lọc ra nhiều loại kháng thể khác nhau.
Hệ thống hiển thị phage T7 có nhiều ưu điểm, bao gồm tính đơn giản, độ an toàn cao, tính ổn định, dễ bảo quản và vận chuyển, do đó hệ thống này được sử dụng trong vắc-xin phòng ngừa và điều trị.
*Hệ thống hiển thị phage T7 có thể phát hiện nhiều loại kháng nguyên khác nhau, chẳng hạn như kháng nguyên bề mặt của vi sinh vật gây bệnh và kháng nguyên ung thư.

Các trường hợp dịch vụ của chúng tôi

DỊCH VỤ

If you have any questions, please feel free to contact us at any time.

Leave Your Message

Dịch vụ nổi bật