Dịch vụ phân tích tương tác protein-protein
Alpha Lifetech cũng có thể cung cấp cho khách hàng các xét nghiệm protein, phân tích tương tác protein, xét nghiệm tương tác protein-protein (CO-IP, Western Blot, xét nghiệm miễn dịch kết tủa chromatin) và xét nghiệm chức năng protein để đáp ứng nhu cầu thí nghiệm của các khách hàng khác nhau.
Yêu cầu báo giá01
Dịch vụ phân tích tương tác protein-protein
Alpha Lifetech đã có nhiều năm kinh nghiệm chuyên sâu trong lĩnh vực phân tích protein, xây dựng được nền tảng vững chắc cho việc phân tích chức năng protein và nắm vững nhiều phương pháp kỹ thuật để xác minh tương tác protein, giúp tiết kiệm thời gian nghiên cứu khoa học hoặc dự án đồng thời mang lại kết quả ổn định.
Alpha Lifetech cũng có thể cung cấp cho khách hàng các xét nghiệm protein, phân tích tương tác protein, xét nghiệm tương tác protein-protein (CO-IP, Western Blot, xét nghiệm miễn dịch kết tủa chromatin) và xét nghiệm chức năng protein để đáp ứng nhu cầu thí nghiệm của các khách hàng khác nhau.
Giới thiệu về phương pháp xét nghiệm tương tác protein-protein
Protein là những phân tử điều hành quan trọng nhất trong mọi dạng sống, đáp ứng các chỉ dẫn được lưu trữ trong vật liệu di truyền. Thông thường, protein thực hiện nhiệm vụ của mình bằng cách đóng vai trò là những "người chơi" tương tác với các protein khác, điều này càng rõ ràng hơn khi chức năng của một protein được xem xét trong bối cảnh thực tế của tế bào. Việc xác định các tương tác giữa các protein rất quan trọng đối với nghiên cứu sinh hóa của một protein riêng lẻ. Phân tích tương tác protein thuộc các loại phổ biến như sau:
Xét nghiệm đồng kết tủa miễn dịch
Nguyên tắc của phương pháp đồng kết tủa miễn dịch là trộn protein mục tiêu, kháng thể đặc hiệu và hạt từ tính protein A/G để ủ, phần dịch nổi chứa protein không liên kết được loại bỏ thông qua quá trình hấp phụ của các hạt từ tính lên giá đỡ từ tính, và các hạt từ tính được rửa sạch để loại bỏ protein và các tạp chất khác trừ khi protein liên kết đặc hiệu.
Hình 1. Sơ đồ minh họa các thí nghiệm Co-IP.(Nguồn tham khảo: Xét nghiệm đồng kết tủa miễn dịch - PubMed (nih.gov))
Thử nghiệm kéo xuống
Phương pháp phân tích kéo xuống (pull-down assay) là cố định protein đã biết lên hạt từ tính và thêm chất cần phát hiện. Dung dịch thu được sẽ được phân tích để xác định sự hấp phụ của các protein tương tác.
Năm 1988, Smith và cộng sự đã tinh chế protein dung hợp GST, được ứng dụng trong các thí nghiệm kéo xuống (pull-down assays) và được gọi là GST pull down, tức là thêm thẻ GST vào protein mục tiêu, bắt giữ protein tương tác thông qua GSH, rửa giải phần liên kết và xác minh bằng các thí nghiệm Western Blot.
Hình 2. Sơ đồ minh họa thí nghiệm kéo xuống GST.(Nguồn tham khảo: Phương pháp xét nghiệm GST Pull-Down để nghiên cứu sự gắn kết của PIF4 trong ống nghiệm - PubMed (nih.gov) )
Phương pháp của ông ấy là sử dụng các ion kim loại như niken hoặc coban làm môi trường, tinh chế protein thông qua sắc ký ái lực, và tách chiết phần liên kết bằng thí nghiệm Western Blot để xác minh.
Ngoài ra, còn có các xét nghiệm kéo xuống DNA (xét nghiệm liên kết protein-DNA), kéo xuống RNA (xét nghiệm tương tác protein-RNA) và xét nghiệm kéo xuống phân tử nhỏ.
Phương pháp tách DNA (DNA Pull-down - xét nghiệm liên kết DNA của protein) là một phương pháp trong ống nghiệm để xác định khả năng liên kết DNA của protein. Việc các protein cụ thể có liên kết với DNA mục tiêu hay không được phát hiện bằng xét nghiệm Western Blot; các đoạn DNA chưa biết liên kết với protein, và xác định các đoạn DNA này bằng phương pháp phát hiện khối phổ (MS).
Phương pháp RNA Pull-down (phân tích tương tác protein-RNA) là một phương pháp trong ống nghiệm để xác định sự liên kết của RNA với protein. Việc các protein cụ thể có liên kết với RNA mục tiêu hay không được phát hiện bằng phương pháp Western Blot; các đoạn RNA chưa biết liên kết với protein, và xác định các đoạn RNA này bằng phương pháp MS.
Phương pháp SM pull-down (phân tích kéo xuống bằng phân tử nhỏ) có thể tìm ra các protein mục tiêu liên kết đặc hiệu với các phân tử nhỏ, và khi kết hợp với MS, các protein mục tiêu của phân tử nhỏ có thể được sàng lọc chính xác, có thể được chia thành phương pháp gắn nhãn trong ống nghiệm và phương pháp trực giao sinh học.
Thí nghiệm WB
Thí nghiệm WB (còn được gọi là thí nghiệm Western Blot hoặc Western blot), bản chất là phản ứng đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể. Nguyên tắc cơ bản là tách các protein bị biến tính bằng điện di trên gel polyacrylamide SDS và chuyển chúng sang chất mang pha rắn (như màng PVDF, màng NC) bằng phương pháp chuyển màng (quay ướt hoặc bán khô). Sau khi chặn (sử dụng BSA, sữa bơ, v.v.), kháng thể chính được sử dụng để liên kết đặc hiệu với protein, và kháng thể phụ được gắn huỳnh quang được thêm vào sau khi rửa màng. Bằng cách liên kết kháng thể phụ với kháng thể chính, protein mục tiêu có thể được quan sát bằng sự phát triển màu sắc của chất nền và phát quang hóa học. Phương pháp này thường được sử dụng để xác định xem một protein cụ thể có được biểu hiện trong mẫu hay không và phân tích sơ bộ mức độ biểu hiện của nó.
So sánh phương pháp tương tác protein-protein
Phương pháp kéo protein (protein pull-down assay) tương tự như phương pháp đồng kết tủa miễn dịch (Co-IP assay), cả hai đều thuộc nhóm thí nghiệm phát hiện tương tác protein. Sự khác biệt giữa hai phương pháp là phương pháp Co-IP thu được các protein tương tác với các protein đã biết, có độ tin cậy nhất định nhưng không thể xác nhận liệu các protein tương tác trực tiếp hay gián tiếp. Phương pháp kéo protein nhằm tìm ra protein chưa biết tương tác với protein đã biết. Nó có thể trực tiếp xác nhận liệu protein đã biết có tương tác với protein được phát hiện hay không nhưng không thể biết được tình trạng liên kết trong cơ thể sống.
Công nghệ đồng kết tủa miễn dịch (Co-immunoprecipitation - Co-IP) được sử dụng để phân tích xem có sự tương tác giữa hai hoặc nhiều protein hay không, dựa trên các thí nghiệm kết tủa miễn dịch. So với các kỹ thuật phân tích tương tác protein khác (GST Pull-down, Western Blot, xét nghiệm kết tủa miễn dịch chromatin, v.v.), công nghệ Co-IP có độ đặc hiệu, độ nhạy và độ lặp lại cao hơn, có thể tránh được sự can thiệp của liên kết không đặc hiệu và phản ánh sự tương tác của protein trong trạng thái tự nhiên.
| GST Kéo xuống | Co-IP | WB | |
|---|---|---|---|
| Lợi thế | *Dễ sử dụng *Thích hợp cho việc tinh chế nhiều loại protein khác nhau. | *Để phân tích tương tác in vivo *Nó có thể được xác định bằng protein hạ nguồn. | *Tính đặc hiệu cao *Định tính và định lượng trong ống nghiệm |
| Hạn chế | *Có thể liên kết không đặc hiệu *Cần tiến hành xác nhận thêm về sự tương tác này. | *Sự phụ thuộc mạnh mẽ vào kháng thể *Có thể xảy ra hiện tượng liên kết không đặc hiệu | *Tốn thời gian *Khó sử dụng cho phân tích protein quy mô lớn |
| Ví dụ ứng dụng | *Xác định các tương tác *Phức hợp protein tinh khiết | *Nghiên cứu quá trình truyền tín hiệu *Cơ chế bệnh lý | Phân tích tiếp theo về tương tác protein-protein, protein-DNA và protein-RNA |
Tùy chỉnh
Tùy chỉnh dịch vụ để đáp ứng nhu cầu của bạn.
Kinh nghiệm
Nhiều năm kinh nghiệm sản xuất protein
Công nghệ
Kết quả giao hàng chất lượng cao
Quy trình thí nghiệm
Quy trình quản lý chất lượng nghiêm ngặt
Nếu có bất kỳ thắc mắc nào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi bất cứ lúc nào.
Leave Your Message
16/07/2018 
0102