אַנטיקערפּער אַפיניטי מאַטוראַציע סערוויס

אַלפֿאַ לייףטעק אינק.קענען אָנבאָטן דעם אַנטיבאָדי אַפיניטי מאַטוראַציע סערוויס דורך ניצן מוטאַציע און סעלעקציע טעכנאָלאָגיעס. מיר נוצן געוויינטלעך scFv ווי דער אַנטיבאָדי פֿאָרמאַט אין די פּראָצעסן פון אַפיניטי מאַטוראַציע סערוויס און אַ מאָנאָוואַלענט דיספּליי פאַגעמיד סיסטעם וואָס איז געניצט געוואָרן צו רעדוצירן די אַווידיטי יפעקץ בעשאַס אַנטיגען-בינדינג סקרינינג. אונדזער פאַכמאַן מאַנשאַפֿט קען אויך צושטעלן אַפיניטי מאַטוראַציע סערוויסעס פֿאַר איין-דאָמעין אַנטיבאָדיעס.

אַלפֿאַ לייףטעק אינק.איז שטאָלץ צו פאָרשלאָגן קאָמפּרעהענסיוו באַדינונגען צו טרעפן די פֿאַרשיידענע באַדערפענישן פֿון גלאָבאַלע קליענטן. אונדזער ציל איז צו פֿאַרשטיין און טרעפן די פֿאָדערונגען פֿון פֿאַרשידענע קאַסטאַמערז און צו העלפֿן מיט יעדע קומענדיקע און אויפֿקומענדיקע פּראָבלעמען אין פֿאָרשונג אַרבעט.

וואָס איז אַפיניטי מאַטוראַציע?

אַפיניטי מאַטוראַציע איז דער פּראָצעס דורך וועלכן אַנטיקערפּערס דורכגיין ריפּיטיד מוטאַציעס און סעלעקציע צו פֿאַרבעסערן זייער אַפיניטי פֿאַר ספּעציפֿישע אַנטיגענס. מערסטנס פֿאָרקומענדיק אין די דזשערמינאַל צענטער פון צווייטיק לימפאָיד אָרגאַנען, דורכגיין B צעלן סאָמאַטיש כייפּערמוטאַציע און סעלעקציע אונטער דער השפּעה פון T צעלן און פאָליקולאַר דענדריטיק צעלן.
בעת דעם אפיניטי מאַטוראַציע פּראָצעס, ווערן B צעלן מיט נידעריק-אפיניטי ייבערפלאַך אימונאָגלאָבולין רעסעפּטאָרן אַקטיוויזירט דורך אַנטיגען באַגעגענישן און דורכגיין פּראָליפעראַציע און דיפערענציאַציע. דורך סאָמאַטיש היפּערמוטאַציע אפיניטי מאַטוראַציע, פּאַסירן ראַנדאָם נוקלעאָטיד סאַבסטיטוציעס אין דער וועריאַבל געגנט פון אימונאָגלאָבולין גענעס, וואָס פירט צו דער פּראָדוקציע פון ​​​​פאַרשידענע אַנטיבאָדי וועריאַנטן. נאָך סאָמאַטיש היפּערמוטאַציע, ווערט אַנטיגען-געטריבן סעלעקציע דורכגעפירט אויף B צעלן מיט מוטירטע אימונאָגלאָבולין רעסעפּטאָרן. B צעלן וואָס פּראָדוצירן אַנטיבאָדיעס מיט געוואקסענער אַנטיגענער אפיניטי ווערן פּרעפערענציעל ריטיינד און ערלויבט צו פּראָליפערירן, בשעת B צעלן מיט פאַרקלענערטער אָדער אַנטשיינדזשד אפיניטי דורכגיין אַפּאָפּטאָסיס. דער איטעראַטיווער פּראָצעס פון מוטאַציע און סעלעקציע פירט צו דער פּראָדוקציע פון ​​​​B צעל קלאָונז, וואָס פּראָדוצירן אַנטיבאָדיעס מיט ביסלעכווייַז העכערער אפיניטי פֿאַר דעם אַנטיגען.

אַנטיקערפּער אַפיניטי מאַטוראַציע סערוויס

די הויפּט מעלות פון PCR-באזירטע מעטאָדן זענען אַז מוטאַציעס זענען פּינקטלעך געצילט צו די אַמפּליפיצירטע פראַגמענט; די טעות קורס איז גרינג צו קאָנטראָלירן און די מעטאָדע איז שנעל און גרינג צו שטעלן און ניצט נישט געפערלעכע כעמיקאַלן. עס איז באַקאַנט אַז די טאַק דנאַ פּאָלימעראַזע דופּליקירט דנאַ מיט נידעריקע געטריישאַפט, באַדייטנד צוליב דער אַוועק פון 3' ביז 5' פּרופרידינג טעטיקייט.אַלפֿאַ לייףטעק'סדי אַנטיבאָדי אינזשעניריע פּלאַטפאָרמע אַפּליקירט אַ טעות-פּראָון PCR צוגאַנג צו מוטירן הויפּטזעכלעך CDR געגנטן בעת ​​סוב-ביבליאָטעק קאַנסטרוקציע. און אָפט שאַפֿן מיר מוטאַציעס אין גאָר ראַנדאָם פּאָזיציעס אַריבער די גאנצע VH און VL פראַגמענטן, כּדי צו פאַרגרעסערן די גענעטישע דייווערסיטי פון דער סוב-ביבליאָטעק. נאָך דער קאַנסטרוקציע פון ​​אַ מוטירטער אַנטיבאָדי גענע ביבליאָטעק דורך טעות-פּראָון PCR, די סעלעקציע פון ​​הויך-אַפיניטי וועריאַנטן (אַפיניטי פון די scFv אַנטיבאָדיעס קען דערגרייכן 10^8 - 10^10 M) איז דורכגעפירט דורך פּאַנינג אין לייזונג אָדער אויף ימאָובאַלייזד אַנטיגען מיט וואַשינג באדינגונגען אָפּטימיזעד פֿאַר אָף-ראַטע-אָפענגיק סעלעקציע.
  
וויסנשאַפֿטלער איןאַלפֿאַ לייףטעק אינק.ניצן Escherichia coli מוטאַטאָר שטאַמען mutAD5TM ווי איינע פון ​​עטלעכע מוטאַציע סטראַטעגיעס צו פאָרשטעלן ראַנדאָם מוטאַציעס, און דערמיט מאָדיפיצירן די אַפיניטי און אויסדרוק פון רעקאָמבינאַנט אַנטיבאָדי פראַגמענטן. סעלעקציע באדינגונגען קענען זיין מאָדיפיצירט פֿאַר אַנטיבאָדי פראַגמענטן מיט געוואקסן פּראָדוקציע לעוועלס. וווּקס באדינגונגען אין Escherichia coli מוטאַטאָר סעלז קענען זיין אַדזשאַסטיד צו פאָרשטעלן אַ איין ראַנדאָם פונט מוטאַציע פּער קילאָבאַסע פון ​​DNA, כּמעט עקוויוואַלענט צו איין קאָדאָן ענדערונג פּער scFv פראַגמענט. נאָך עטלעכע סייקאַלז פון מוטאַציע, אַרויסווייַזן, און סעלעקציע, מיר קענען פֿאַרבעסערן די אַפיניטי קאָנסטאַנט פון 10^5 - 10^6 M צו 10^8 - 10^10 M.

פֿאַרבעסערן אַפֿיניטי מאַטוראַציע סטראַטעגיעס

געוויסע פאזיציעס פון אנטיקערפער קענען ווערן ראנדאמיזירט ביי א דעפינירטער דייווערסיטי (אזוי ווי פולע ראנדאמיזאציע מיט אלע 20 אמינא זויערן אדער בייעסד ראנדאמיזאציע מיט אויסגעקליבענע אמינא זויערן ביי פעסטע פראצענטן) צו פארבעסערן די אפיניטי. מיר האבן צוויי סטראטעגיעס צו פארבעסערן די אנטיקערפער אפיניטי: ערשטנס, מוטאציעס ווערן איינגעפירט ביי באגרענעצטע פאזיציעס אין די קאמפלעמענטאריטעט-באשטימענדיקע ראיאנען (CDRs) דורך סייט-דירעקטעד מוטאגענעסיס; צווייטנס, מוטאציעס ווערן איינגעפירט אין די גאנצע V-קאודירנדע ראיאנען דורך ראנדאם מוטאגענעסיס. דורך ניצן די צוויי מעטאדן, וועלן די קאנסערווירטע אמינא-זויער סיקווענצן אדער די גאנצע פריימווערק ראיאן פון די אנטיקערפער ווערן סובסטיטוטירט מיט אנדערע אמינא זויערן, וואס צוזאמען מיט אונזערע פעפטיד ביבליאטעק סקענירן טעכנאלאגיעס, קענען גאר שטארק פארגרעסערן די אפיניטי פון אנטיקערפער פון אינטערעס צו א זייער הויכן לעוועל.

פאַגע דיספּליי-אַנטיבאָדי אַפיניטי

אזוי שנעל ווי די scFv מוטאנט ביבליאטעק איז שוין קאנסטרואירט געווארן, זענען פאראן צוויי סקרינינג סטראטעגיעס: ביאָפּענינג און סארטירן מיט סאליד-אנטיגען. אין דער ערשטער, ווערט א סובטראקטיווע קאנצענטראציע פון ​​סובסטראט גענוצט צו אפגעזונדערן דעם הויך-אפיניטי אנטיקערפער, ווייל די נידעריג-אפיניטי מוטאנטן וואלטן אויסגעוואשן געווארן, לאזנדיג די הויך-אווידיטעט פאג פארטיקלען. די צווייטע סטראטעגיע נוצט א באצייכנטן אנטיגען אין לייזונג, סעלעקציע באזירט אויף דער גלייכגעוויכט קאנסטאנט (Kd), און סעלעקציע באזירט אויף בינדינג קינעטיק, דער סעלעקציע צוגאנג זינד אויס אנטיקערפער וואריאנטן מיט פארבעסערטן Kd.

אויב איר האָט פֿראַגעס, ביטע פֿילט זיך פֿרײַ צו קאָנטאַקטירן אונדז אין יעדער צײַט.