וואָס איז אַנטיבאָדי אינזשעניריע?

מיט דער הילף פון אַנטיבאָדי אינזשעניריע, איז עס געווען מעגלעך צו מאָדיפיצירן די מאָלעקולאַרע גרייס, פאַרמאַקאָקינעטיק, ימיונאָגעניסיטי, בינדינג אַפיניטי, ספּעציפֿישיטי און עפֿעקטאָר פֿונקציע פון ​​אַנטיבאָדיעס. נאָך סינטעזירן אַנטיבאָדיעס, מאַכט די ספּעציפֿישע בינדונג פון אַנטיבאָדיעס זיי זייער ווערטפול אין קלינישער דיאַגנאָז און באַהאַנדלונג. דורך אַנטיבאָדי אינזשעניריע, קענען זיי מקיים זיין די באדערפענישן פון מעדיצין און דיאַגנאָסטיש פרי אַנטוויקלונג.

דער ציל פון אַנטיבאָדי אינזשעניריע איז צו דיזיינען און פּראָדוצירן העכסט ספּעציפֿישע, סטאַבילע פונקציעס וואָס נאַטירלעכע אַנטיבאָדיעס קענען נישט דערגרייכן, און לייגן דעם יסוד פֿאַר דער פּראָדוקציע פון ​​טעראַפּעווטישע אַנטיבאָדיעס.

אלפא לייףטעק, מיט איר ברייטער פראיעקט דערפארונג אין אנטיקערפער אינזשעניריע, קען צושטעלן קאסטומיזירטע מאנאקלאנאלע און פאליקלאנאלע אנטיקערפער סערוויסעס פאר פארשידענע מינים, ווי אויך פאגע דיספלעי אנטיקערפער ביבליאטעק קאנסטרוקציע און סקרינינג סערוויסעס. אלפא לייףטעק קען צושטעלן קאסטומערס מיט קוואליטעט ביאסימילאר אנטיקערפער און רעקאמבינאנט פראטעין פראדוקטן, ווי אויך קארעספאנדירנדע סערוויסעס, צו פראדוצירן עפעקטיווע, העכסט ספעציפישע, און סטאבעלע אנטיקערפער. דורך נוצן קאמפרעהענסיווע אנטיקערפער, פראטעין פלאטפארמעס און פאגע דיספלעי סיסטעמען, צושטעלן מיר סערוויסעס וואס דעקן די אויבערשטע און אונטערשטע טיילן פון אנטיקערפער פראדוקציע, אריינגערעכנט טעכנישע סערוויסעס ווי אנטיקערפער הומאַניזאציע, אנטיקערפער רייניקונג, אנטיקערפער סיקווענסינג, און אנטיקערפער וואַלידאַציע.

די פּיאָנירישע בינע פון ​​אַנטיבאָדי אינזשעניריע איז פֿאַרבונדן מיט צוויי טעכנאָלאָגיעס:

--רעקאָמבינאַנט דנאַ טעכנאָלאָגיע

--היברידאָמאַ טעכנאָלאָגיע

די שנעלע אַנטוויקלונג פון אַנטיבאָדי אינזשעניריע איז פֿאַרבונדן מיט דריי וויכטיקע טעכנאָלאָגיעס:

--גענע קלאָונינג טעכנאָלאָגיע און פּאָלימעראַזע קייט רעאַקציע

פּראָטעין אויסדרוק: רעקאָמבינאַנט פּראָטעאינען ווערן פּראָדוצירט דורך אויסדרוק סיסטעמען ווי הייוון, שטאַנג-פאָרמיקע ווירוסן און פלאַנצן.

--קאָמפּיוטער-געשטיצטע סטרוקטורעלע פּלאַן

די ערשטע דור פון אנטיקערפערס זענען געווארן מענטשליזירט פאר דער פראדוקציע פון ​​כימערישע אנטיקערפערס, וואו די וועריאַבלע ראיאן פון מויז מאָנאָקלאָנאַל אנטיקערפערס איז געווען פארבונדן מיט דער קאנסטאַנטער ראיאן פון מענטשלעכע IgG מאלעקולן. די אַנטיגען בינדינג ראיאן (CDR) פון די צווייטע-דור מויז מאָנאָקלאָנאַל אנטיקערפער איז געווארן טראַנספּלאַנטירט אין מענטשלעכן IgG. אחוץ די CDR ראיאן, זענען אלע אנדערע אנטיקערפערס כמעט מענטשלעכע אנטיקערפערס, און מען האט געמאכט אנשטרענגונגען צו פארמיידן צו אינדוצירן מענטשלעכע אַנטי-מויז אנטיקערפער (HAMA) רעאקציעס ווען מען ניצט מויז קלאָן אנטיקערפערס פאר מענטשלעכע באַהאַנדלונג.

 

צו קאנסטרואירן א פאג דיספלעי ביבליאטעק, איז דער ערשטער שריט צו באקומען די גענעס וואס קאדירן אנטיקערפערס, וועלכע קענען אפגעזונדערט ווערן פון ב צעלן פון אימיוניזירטע בעלי חיים (אימיונישע ביבליאטעק קאנסטרוקציע), עקסטראקטירט גלייך פון נישט אימיוניזירטע בעלי חיים (נאטירלעכע ביבליאטעק קאנסטרוקציע), אדער אפילו צוזאמענגעשטעלט ווערן אין וויטרא מיט אנטיקערפער גען פראגמענטן (סינטעטישער ביבליאטעק קאנסטרוקציע). דערנאך ווערן די גענעס פארגרעסערט דורך PCR, אריינגעשטעלט אין פלאזמידן, און אויסגעדריקט אין פאסיגע באלעבאס סיסטעמען (הייוון אויסדרוק (געווענליך פּיטשיאַ פּאַסטאָריס), פּראָקאַריאָטיש אויסדרוק (געווענליך E. coli), זויגער צעל אויסדרוק, פלאנץ צעל אויסדרוק, און אינסעקט צעל אויסדרוק אינפעקטירט מיט שטאנג-פארמיגע ווירוסן). די מערסטע פארשפרייטע איז די E. coli אויסדרוק סיסטעם, וואס אינטעגרירט א ספעציפישע קאדירנדע אנטיקערפער סיקווענס אויף דעם פאג און קאדירט איינע פון ​​די פאג שאָל פּראָטעאינען (pIII אדער pVIII). די גען פיוזשאן פון, און אויסגעשטעלט אויף דער ייבערפלאך פון באַקטעריאָפאַגעס. דער קערן פון דעם טעכנאָלאָגיע איז צו קאנסטרואירן א פאג דיספלעי ביבליאטעק, וואס האט דעם פארטייל איבער נאטירלעכע ביבליאטעקן אין דעם אז עס קען האבן ספעציפישע בינדונג. דערנאך ווערן אנטיקערפערס מיט אנטיגען ספעציפישקייט דורכגעקוקט דורך א ביאלאגישן סעלעקציע פראצעס, ציל אנטיגענס ווערן פיקסירט, נישט-געבונדענע פאגעס ווערן איבערגעוואשן אוועק, און געבונדענע פאגעס ווערן אוועקגעוואשן פאר ווייטערדיגע בארייכערונג. נאך דריי אדער מער רונדעס פון איבערחזרן ווערן הויך ספעציפישקייט און הויך אפיניטי אנטיקערפערס אפגעזונדערט.

פיגור 3: קאנסטרוקציע און סקרינינג פון אנטיקערפער ביבליאטעק

רעקאָמבינאַנט דנאַ טעכנאָלאָגיע קען גענוצט ווערן צו שאַפֿן אַנטיבאָדי פראַגמענטן. פאַב אַנטיבאָדיעס קענען אָנהייב נאָר כיידראָליזירט ווערן דורך גאַסטריק פּראָטעאַזע צו פּראָדוצירן (פאַב')2 פראַגמענטן, וואָס ווערן דערנאָך פֿאַרדייַען דורך פּאַפּאַין צו שאַפֿן יחיד פאַב פראַגמענטן. דער Fv פראַגמענט באַשטייט פֿון VH און VL, וואָס האָבן אַ שלעכטע סטאַביליטעט צוליב דעם אָפּוועזנהייט פֿון דיסולפֿייד בונדן. דעריבער, VH און VL זענען פֿאַרבונדן צוזאַמען דורך אַ קורצן פּעפּטיד פֿון 15-20 אַמינאָ זויערן צו שאַפֿן אַן איין-קייט וואַריאַבלע פראַגמענט (scFv) אַנטיבאָדי מיט אַ מאָלעקולאַר וואָג פֿון אַרום 25KDa.

די שטודיע פון ​​אַנטיבאָדי סטרוקטור אין קאַמעלידאַ (קעמל, ליאַמאַ, און אַלפּאַקאַ) האָט קלאָר געמאַכט אַז אַנטיבאָדיעס האָבן בלויז שווערע קייטן און קיין לייכטע קייטן, דעריבער ווערן זיי גערופן שווערע קייט אַנטיבאָדיעס (hcAb). די וועריאַבאַל דאָמעין פון שווערע קייט אַנטיבאָדיעס ווערט גערופן איין דאָמעין אַנטיבאָדיעס אָדער נאַנאָבאָדיעס אָדער VHH, מיט אַ גרייס פון 12-15 kDa. ווי מאָנאָמערן, האָבן זיי קיין דיסולפיד בונדן און זענען זייער סטאַביל, מיט אַ זייער הויך אַפיניטי פֿאַר אַנטיגענס.

פיגור 5: שווערע קייט אנטיקערפער און VHH/ נאנאקערפער

צעל פרייע אויסדרוק ניצט די אויסדרוק פון נאַטירלעכער אדער סינטעטישער דנ״א צו דערגרייכן אין וויטראָ פּראָטעין סינטעז, טיפּיש ניצנדיק די ע. קאָלי אויסדרוק סיסטעם. עס פּראָדוצירט פּראָטעאינען שנעל און פֿאַרמייַדט די מעטאַבאַלישע און ציטאָטאָקסישע לאַסט אויף צעלן ווען מען פּראָדוצירט גרויסע סומעס פון רעקאָמבינאַנט פּראָטעאינען אין וויוואָ. עס קען אויך פּראָדוצירן פּראָטעאינען וואָס זענען שווער צו סינטעזירן, אַזאַ ווי די וואָס זענען שווער צו מאָדיפֿיצירן נאָך איבערזעצונג אָדער סינטעזירן מעמבראַן פּראָטעאינען.