Kini Imọ-ẹrọ Antibody?

Pẹlu iranlọwọ ti imọ-ẹrọ antibody, o ti ṣee ṣe lati yipada iwọn molikula, pharmacokinetics, ajẹsara, affinity, pato ati iṣẹ ipa ti awọn aporo. Lẹhin sisọpọ awọn apo-ara, isomọ kan pato ti awọn apo-ara jẹ ki wọn niyelori pupọ ni ayẹwo ile-iwosan ati itọju. Nipasẹ imọ-ẹrọ antibody, wọn le pade awọn iwulo oogun ati idagbasoke iwadii aisan.

Idi ti imọ-ẹrọ antibody ni lati ṣe apẹrẹ ati gbejade ni pato gaan, awọn iṣẹ iduroṣinṣin ti awọn apo-ara ti ara ko le ṣaṣeyọri, fifi ipilẹ fun iṣelọpọ ti awọn apo-ara ti itọju ailera.

Alpha Lifetech, pẹlu iriri iṣẹ akanṣe nla rẹ ni imọ-ẹrọ antibody, le pese monoclonal ti adani ati awọn iṣẹ antibody polyclonal fun awọn eya lọpọlọpọ, bakanna bi iṣelọpọ ile ikawe antibody phage ati awọn iṣẹ iboju. Alpha Lifetech le pese awọn alabara pẹlu awọn ọlọjẹ biosimilar didara ati awọn ọja amuaradagba isọdọtun, gẹgẹbi awọn iṣẹ ti o baamu, lati ṣe agbejade daradara, pato gaan, ati awọn ọlọjẹ iduroṣinṣin. Nipa lilo agboguntaisan okeerẹ, awọn iru ẹrọ amuaradagba ati awọn eto ifihan phage, a pese awọn iṣẹ ti o bo oke ati isalẹ ti iṣelọpọ antibody, pẹlu awọn iṣẹ imọ-ẹrọ gẹgẹbi eniyan ajẹsara, isọdi ara-ara, ilana-ara antibody, ati afọwọsi antibody.

Ipele aṣáájú-ọnà ti imọ-ẹrọ antibody jẹ ibatan si awọn imọ-ẹrọ meji:

--Atunṣe imọ-ẹrọ DNA

--Hybridoma ọna ẹrọ

Idagbasoke iyara ti imọ-ẹrọ antibody jẹ ibatan si awọn imọ-ẹrọ pataki mẹta:

Imọ-ẹrọ cloning Gene ati iṣesi pq polymerase

--Ikosile Amuaradagba: Awọn ọlọjẹ atunda jẹ iṣelọpọ nipasẹ awọn eto ikosile gẹgẹbi iwukara, awọn ọlọjẹ ti o ni apẹrẹ, ati awọn irugbin

- Kọmputa ṣe iranlọwọ apẹrẹ igbekalẹ

Iran akọkọ ti awọn apo-ara ni a ṣe eniyan fun iṣelọpọ ti awọn ọlọjẹ chimeric, nibiti agbegbe oniyipada ti awọn aporo monoclonal Asin ti sopọ mọ agbegbe igbagbogbo ti awọn ohun elo IgG eniyan. Ekun abuda antijeni (CDR) ti iran-keji asin monoclonal antibody ti wa ni gbigbe sinu IgG eniyan. Ayafi fun agbegbe CDR, gbogbo awọn apo-ara miiran jẹ fere awọn apo-ara eniyan, ati pe a ṣe akitiyan lati yago fun idasi awọn idahun antibody anti-eku eniyan (HAMA) nigba lilo awọn apo-ara asin oniye fun itọju eniyan.

 

Lati kọ ile-ikawe ifihan phage kan, igbesẹ akọkọ ni lati gba awọn jiini ti n ṣe koodu awọn aporo-ara, eyiti o le ya sọtọ lati awọn sẹẹli B ti awọn ẹranko ti ajẹsara (itumọ ile ikawe ajesara), ti a fa jade taara lati awọn ẹranko ti ko ni ajesara (itumọ ile ikawe adayeba), tabi paapaa pejọ ni vitro pẹlu awọn ajẹku jiini antibody (Itumọ ile ikawe sintetiki). Lẹhinna, awọn Jiini ti wa ni imudara nipasẹ PCR, ti a fi sii sinu awọn plasmids, ti a si fi han ni awọn eto ogun ti o yẹ (ikosile iwukara (nigbagbogbo Pichia pastoris), ikosile prokaryotic (nigbagbogbo E. coli), ikosile sẹẹli mammalian, ikosile sẹẹli ọgbin, ati ikosile sẹẹli kokoro ti o ni arun pẹlu awọn ọlọjẹ ti o ni apẹrẹ ọpa). Ohun ti o wọpọ julọ ni eto ikosile E. coli, eyiti o ṣepọ kan pato fifi koodu pa akoonu antibody sori phage ati fifi koodu si ọkan ninu awọn ọlọjẹ ikarahun phage (pIII tabi pVIII). Jiini seeli ti, Ati han lori dada ti bacteriophages. Pataki ti imọ-ẹrọ yii ni lati kọ ile-ikawe ifihan phage kan, eyiti o ni anfani lori awọn ile-ikawe adayeba ni pe o le ni isomọ kan pato. Lẹhinna, awọn apo-ara ti o ni pato antijeni ni a ṣe ayẹwo nipasẹ ilana yiyan ti ibi, awọn antigens ibi-afẹde ti wa ni ipilẹ, awọn fagi ti a ko sopọ ni a fọ ​​leralera, ati awọn phages ti a so ni a fọ ​​kuro fun imudara siwaju sii. Lẹhin awọn iyipo mẹta tabi diẹ ẹ sii ti atunwi, iyasọtọ giga ati awọn apo-ara ibaramu giga ti ya sọtọ.

olusin 3: Antibody Library Ikole ati waworan

Imọ-ẹrọ DNA atunda le ṣee lo lati ṣe ipilẹṣẹ awọn ajẹkù antibody. Awọn ajẹsara Fab le wa lakoko hydrolyzed nikan nipasẹ protease inu lati gbejade (Fab ') awọn ajẹkù 2, eyiti o jẹ digested nipasẹ papain lati ṣe ipilẹṣẹ awọn ajẹkù Fab kọọkan. Ajeku Fv jẹ VH ati VL, eyiti o ni iduroṣinṣin ti ko dara nitori isansa ti awọn iwe ifowopamosi disulfide. Nitorinaa, VH ati VL ni asopọ papọ nipasẹ peptide kukuru kan ti awọn amino acids 15-20 lati ṣe agbekalẹ apaja oniyipada pq kan (scFv) egboogi pẹlu iwuwo molikula ti isunmọ 25KDa.

Iwadi ti eto antibody ni Camelidae (Rakasiẹ, LIama, ati Alpaca) ti ṣalaye pe awọn apo-ara nikan ni awọn ẹwọn wuwo ati pe ko si awọn ẹwọn ina, nitorinaa wọn pe wọn ni awọn egboogi pq eru (hcAb). Agbegbe oniyipada ti awọn apo-ara pq eru ni a pe ni awọn aporo-ara agbegbe kan tabi awọn nanobodies tabi VHH, pẹlu iwọn 12-15 kDa. Gẹgẹbi awọn monomers, wọn ko ni awọn ifunmọ disulfide ati pe wọn jẹ iduroṣinṣin pupọ, pẹlu isunmọ giga pupọ fun awọn antigens.

Aworan 5: Eru Pq Antibody ati VHH/ Nanobody

Ọrọ ikosile ọfẹ alagbeka nlo ikosile ti ẹda tabi DNA sintetiki lati ṣaṣeyọri iṣelọpọ amuaradagba in vitro, ni deede lilo eto ikosile E. coli. O ṣe agbejade awọn ọlọjẹ ni kiakia ati yago fun ijẹ-ara ati ẹru cytotoxic lori awọn sẹẹli nigbati o nmu awọn iwọn nla ti awọn ọlọjẹ recombinant ni vivo. O tun le ṣe awọn ọlọjẹ ti o nira lati ṣepọ, gẹgẹbi awọn ti o nira lati yipada lẹhin itumọ tabi ṣepọ awọn ọlọjẹ awọ.